打开主菜单

酶聯螢光原位雜交

(重定向自CARD-FISH

酶聯熒光原位雜交(catalyzed reporter deposition fluorescent in situ hybridization,CARD-FISH,直譯爲催化報告沉積熒光原位雜交),是熒光原位雜交(FISH)的一種變形,可以更有效地增加信號強度,避免背景干擾。

在通常的FISH中,核酸探針被熒光分子直接標記;而在CARD-FISH中,探針與辣根過氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)相連。完成雜交後,洗去游離的探針,加入和熒光標記的tyramide和過氧化氫,將熒光連接在有探針結合的細胞的蛋白質上。這樣,一個探針可以將很多熒光分子沉積在細胞内,起到放大信號的作用,因此比普通的FISH更爲敏感。

但由於辣根過氧化物酶比普通熒光分子要大得多,無法通過細胞膜,因此實驗中必須對細胞做通透性處理。這樣對於具有不同外圍結構的細胞,通透性會相差很大並影響信號強弱。