DAPI

化合物

DAPI4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料,常用於螢光顯微鏡觀測[1]。因為DAPI可以透過完整的細胞膜[2],它可以用于活細胞和固定細胞的染色

DAPI
IUPAC名
2-(4-Amidinophenyl)-1H-indole-6-carboxamidine
别名 4',6-Diamidino-2-phenylindole
识别
CAS号 28718-90-3  ✓
PubChem 2954
ChemSpider 2848
SMILES
InChI
InChIKey FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYAH
ChEBI 51231
性质
化学式 C16H15N5
摩尔质量 277.32 g·mol−1
若非注明,所有数据均出自一般条件(25 ℃,100 kPa)下。

历史编辑

1971年DAPI在一项关于制抗锥虫病英语Trypanosomiasis的药物的研究中由Otto Dann的实验室首次合成,虽然它不是一种成功的药物,但更深入的研究表明它在与DNA强力结合时发出更强的荧光,因此在1975年它被用在超速离心分析法中以标记线粒体DNA。与DNA结合时激发的强荧光使它被广泛用于荧光显微镜技术中对DNA的染色。上世纪70年代末证实DAPI可以被用来在植物微生物多细胞动物细菌[3]细胞中追踪DNA,1977年证实它可以被用来定量给细胞中的DNA染色,同时也证实DAPI可在流式细胞术中用作DNA染料[4]

荧光属性编辑

发射与吸收波长编辑

螢光顯微鏡觀察下,與雙股DNA結合的DAPI染劑在358 nm(紫外线)处有一个最大吸收峰,并在461 nm(蓝)处有一个最大发射峰,其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色,因此在荧光显微技术中DAPI被紫外线照亮且被蓝或青色滤镜检出。DAPI也可以和RNA結合,但產生的螢光強度不及與DNA結合的結果,其發射光的波長範圍約在400 nm左右。[5][6][7]

DAPI的發射光為藍色,且DAPI和荧光素綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染劑(紅色螢光染劑)的發射波長,僅有少部分重疊,研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重螢光染色。如果需要十分精确的分析,可以使用光谱去混合(spectral unmixing)技術計算此一影响。

 
DAPI 结合于DNA小沟(蓝和绿). From PDB 1D30.

吸收模型编辑

2013年,有研究者以含时密度泛函理论英语Time-dependent density functional theory等電位聚焦连续极化介质模型英语Polarizable continuum model描述了DAPI與DNA結合與發出螢光的機制,此一量子力学模型解释了DAPI與DNA結合後吸收與发射光譜的現象,與DNA的結合會使DAPI分子因位向限制導致幾何彈性降低,且周圍圍環境的極性甚低會導致DAPI分子的極性降低。[8]

用途编辑

除了用于分析荧光显微法以外,DAPI也经常在细胞培养中被用于追踪侵染的支原体病毒。在培养基上培养的支原体病毒颗粒被DAPI染色后会发出荧光而易于追踪。[9]

DAPI也经常在流式细胞术中用于区分不同细胞周期时相的细胞。[10][11]


活细胞安全性编辑

毒性编辑

DAPI可用于固定细胞染色,但是因为活细胞染色对DAPI浓度有严格要求,它很少被用于活细胞染色。[12]虽然DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合[2],但是MSDS[13]和其他文献[2]认为DAPI没有毒性。

有研究表明,大剂量的DAPI可以导致小鼠中毒死亡,LD50= 基质 37.3 mg/kg。[14]

潜在的诱变性编辑

DAPI被視為一種致癌物。尽管DAPI没有显现出对大腸桿菌的诱变性[15],在机器制造商提供的信息上,DAPI被认为是一种DNA诱变剂[7]。由于DAPI可以掺入DNA螺旋中,它很可能具有底层的DNA诱变性,在使用過程中應注意配制、使用與拋棄的處理程序。

替代编辑

 
以DAPI(蓝)與鬼笔环肽(红)染色的內皮細胞,另外綠色為與使用與异硫氰酸荧光素英语fluorescein isothiocyanate結合的抗體進行免疫荧光法英语Immunofluorescence的結果

类似于DAPI技术,赫斯特染色是一种既可以用于活细胞也可以用于固定细胞的蓝色荧光染料[16],并且可以使用与DAPI相同的机器滤镜设置。

参见编辑

參考資料编辑

  1. ^ 4',6-二脒基-2-苯基吲哚. 来邦网. [2010-01-21]. 
  2. ^ 2.0 2.1 2.2 徐锦堂; 王黎; 周清; 杨艳; 陈剑. CM_Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究_王黎.pdf. 2013. doi:10.13389/j.cnki.rao.2013.11.001. 
  3. ^ M Cassan; E Boy; F Borne. Regulation of the lysine biosynthetic pathway in Escherichia coli K-12: isolation of a cis-dominant constitutive mutant for AK III synthesis.. J Bacteriol. 1975 Aug. PMID 238953. 
  4. ^ Kapuscinski J. DAPI: a DNA-specific fluorescent probe. Biotech Histochem. September 1995, 70 (5): 220–33. PMID 8580206. doi:10.3109/10520299509108199. 
  5. ^ Scott Prahl, DAPI. accessed 2009-12-08.
  6. ^ Kapuscinski J., [1]. accessed 2013-02-25.
  7. ^ 7.0 7.1 Invitrogen, DAPI Nucleic Acid Stain 互联网档案馆存檔,存档日期2009-03-06.. accessed 2009-12-08.
  8. ^ A. Biancardi; T. Biver; F. Secco; B. Mennucci. An investigation of the photophysical properties of minor groove bound and intercalated DAPI through quantum-mechanical and spectroscopic tools.. Phys. Chem. Chem. Phys. 2013, 15: 4596. Bibcode:2013PCCP...15.4596B. doi:10.1039/C3CP44058C. 
  9. ^ RUSSELL, W. C.; NEWMAN, CAROL; WILLIAMSON, D. H. A simple cytochemical technique for demonstration of DNA in cells infected with mycoplasmas and viruses. Nature. 1975, 253 (5491): 461–462. Bibcode:1975Natur.253..461R. doi:10.1038/253461a0. 
  10. ^ Ashraf M. Khalil. B Cell Signal Transduction in Germinal Center B Cells is Short-Circuited by Increased Phosphatase Activity. Science. 2012 Jun 1 [2019-05-11]. 
  11. ^ Kerenyi, Marc A; Shao, Zhen; Hsu, Yu-Jung; Guo, Guoji; Luc, Sidinh; O'Brien, Kassandra; Fujiwara, Yuko; Peng, Cong; Nguyen, Minh; Orkin, Stuart H. Histone demethylase Lsd1 represses hematopoietic stem and progenitor cell signatures during blood cell maturation. eLife. 2013-06-18, 2 (2013; 2) [2019-05-11]. PMID 23795291. doi:10.7554/eLife.00633. 
  12. ^ Zink D, Sadoni N, Stelzer E. Visualizing Chromatin and Chromosomes in Living Cells. Usually for the live cells staining Hoechst Staining is used. DAPI gives a higher signal in the fixed cells compare to Hoechst Stain but in the live cells Hoechst Stain is used.. Methods. 2003, 29 (1): 42–50. PMID 12543070. doi:10.1016/S1046-2023(02)00289-X. 
  13. ^ http://www.kpl.com/docs/msds/710301.pdf
  14. ^ Slieger RF; 等. DAPI对鼠疟的治疗作用.pdf. 1980. doi:10.13389/j.cnki.rao.2013.11.001. 
  15. ^ Ohta T, Tokishita S, Yamagata H. Ethidium bromide and SYBR Green I enhance the genotoxicity of UV-irradiation and chemical mutagens in E. coli.. Mutat. Res. 2001, 492 (1–2): 91–7. PMID 11377248. doi:10.1016/S1383-5718(01)00155-3. 
  16. ^ Latt, SA; Stetten, G; Juergens, LA; Willard, HF; Scher, CD. Recent developments in the detection of deoxyribonucleic acid synthesis by 33258 Hoechst fluorescence.. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. July 1975, 23 (7): 493–505. PMID 1095650. doi:10.1177/23.7.1095650.