磷酸單酯水解酶（英語：Phosphoric monoester hydrolases或 phosphomonoesterases）是一種催化O-P鍵水解的酶，利用半胱氨酸殘基或金屬離子攻擊磷原子來進行親核取代反應。
這類酶的EC編號為：3.1.3.
例子包括：
- 酸性磷酸酶（acid phosphatase）
- 鹼性磷酸酶（alkaline phosphatase）
- fructose-bisphosphatase
- glucose-6-phosphatase
- 磷酸果糖激酶2（phosphofructokinase-2）
- phosphoprotein phosphatase
- 鈣調磷酸酶（calcineurin）
- 6-phytase
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