北方墨点法
北方墨点法（英语：Northern blot），又称 RNA 印迹法，是分子生物学、生物化学中常用的实验方法，通过探测样品中的RNA（或隔离的mRNA）来研究基因表达。[1][2]
利用探针侦测由凝胶电泳分离出来的RNA片段，寻找含有特定序列的RNA片段。与南方墨点法相似，RNA样品经过凝胶电泳后会按照大小分离，然后将样品从凝胶转印到膜上，并用与目标序列互补的标记的探针来探测。实验结果可以根据所用探针的不同，以多种方式来观察，但大多数都显示的是样品中被探测的RNA条带的相对位置，也就是分子大小；而条带的强度则与样品中目标RNA的含量相关。这一方法可以测量目标RNA在不同样品中的情况，因此已经被普遍用于研究特定基因在生物体中表现的时刻和表现量，也是这类研究中最基本的手段。
发明者是史丹佛大学的James Alwine和乔治·斯塔克（George Stark）在1977年发明，其名字是源于第一种墨点技术，南方墨点法（命名者为Edwin Southern）[1]，两者很相似，与南方墨点法主要的不同是北方墨点法探测的是RNA分子，而不是DNA分子。[3]
原理
编辑与南方墨点法相似，胶体可以选用琼脂凝胶或是聚丙烯酰胺凝胶，被检测物是RNA，“探针”(probe)是与目标序列互补的RNA、DNA序列或是寡核苷酸，但是探针至少要有25个碱基对与目标序列互补。
胶体
编辑RNA样品通常以含甲醛的琼脂凝胶电泳来分离，甲醛作为RNA变性剂，将RNA的二级结构变性成一级结构。凝胶内用溴化乙锭(EtBr)染色，可在UV光下观察到RNA样品的品质、大小。
实验步骤
编辑实验大至分为铸胶、跑胶、转渍、北方杂合反应等几个部分。
参见
编辑参考文献
编辑- ^ 1.0 1.1 Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J. Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell, 5th ed. Garland Science, Taylor & Francis Group, NY, pp 538–539.
- ^ Kevil, C. G., Walsh, L., Laroux, F. S., Kalogeris, T., Grisham, M. B., Alexander, J. S. (1997) An Improved, Rapid Northern Protocol. Biochem. and Biophys. Research Comm. 238:277–279.
- ^ Bor, Y.C.; Swartz, J.; Li, Y.; Coyle, J.; Rekosh, D.; Hammarskjold, Marie-Louise. Northern Blot analysis of mRNA from mammalian polyribosomes. Nature Protocols. 2006. doi:10.1038/nprot.2006.216.
外部链接
编辑
- （英文）OpenWetWare（页面存档备份，存于互联网档案馆）